Skip to content

Sirolimus dla mięsaka Kaposiego u osób po przeszczepieniu nerki cd

2 tygodnie ago

470 words

Drugą biopsję wykonano sześć miesięcy po rozpoczęciu leczenia syrolimusem w miejscu poprzedniej zmiany mięsaka Kaposiego, aby potwierdzić histologicznie histologię guza. Próbki biopsyjne utrwalono w 4% formaldehydzie i zatopiono w parafinie zgodnie ze standardowymi procedurami. Próbki skóry zatopione w parafinie zastosowano do konwencjonalnego barwienia histologicznego. Porcję każdej próbki z biopsji natychmiast zamrożono w podłożu do zamrażania tkanek (Tissuetek) i przechowywano w temperaturze -80 ° C. Immunohistochemia
Specyficzne mysie przeciwciało monoklonalne przeciwko aminokwasom 1158 do 1345 Flk-1 / KDR (Santa Cruz Biotechnology) zastosowano do identyfikacji białka na zamrożonych, utrwalonych acetonem odcinkach nerki, które miały grubość 5 .m. Przeciwciało mysie wykrywano za pomocą metody awidyna-alkaliczna fosfataza z oczyszczonym przez powinowactwo króliczym anty-mysim IgG (Dako) i kompleksem awidyna-alkaliczna fosfataza (rozcieńczenie 1:50; Dako) w dwuetapowej technice. Fosfatazę alkaliczną barwiono substratem naftolowym i szybkim czerwonym chromogenem TR (Dako). Preparaty wybarwiono kontrastowo hematoksyliną. Kontrole negatywne uzyskano przez pominięcie pierwszorzędowego przeciwciała i użycie króliczej surowicy z antymaterii jako pierwszej warstwy. Poziomy białka oceniano półilościowo (za pomocą ocen w zakresie od 0 do 100, z wyższymi wynikami wskazującymi na intensywniejsze barwienie) przez dwóch obserwatorów, którzy nie byli świadomi pochodzenia slajdów.
Immunofluorescencja i konfokalna skaningowa mikroskopia laserowa
Poziom ekspresji białka VEGF i fosforylowanej Akt lub kinazy p70S6 oceniano za pomocą pośredniej immunofluorescencji i mikroskopii konfokalnej. Pierwszorzędowym przeciwciałem stosowanym do wykrywania VEGF było królicze przeciwciało poliklonalne przeciwko wariantom białka splicingowego 165-, 189- i 121-aminokwasowego (Santa Cruz Biotechnology).
Fosforylację kinazy Akt i p70S6 oceniano za pomocą specyficznych przeciwciał przeciwko fosforylowanej, a więc aktywnej formie enzymów. Dla każdego enzymu przeprowadziliśmy podwójną fluorescencję immunolabelku, aby ocenić na tym samym odcinku tkanki ekspresję enzymu i poziomy jego aktywowanej postaci. Mysie przeciwciało monoklonalne przeciwko Akt1 rozpoznaje sekwencję 345 do 480 ludzkiej Akt1 (Santa Cruz Biotechnology). Przeciwciało przeciw fosforylowanej Akt1 było króliczym przeciwciałem poliklonalnym hodowanym przeciwko krótkiej sekwencji aminokwasowej zawierającej fosforylowaną serynę w pozycji 473 ludzkiego pochodzenia (Santa Cruz Biotechnology). Mysie przeciwciało monoklonalne wzbudzono przeciwko peptydowi na końcu karboksylowym szczurzego kinazy p70S6 (Santa Cruz Biotechnology). Mysie przeciwciało monoklonalne wzbudzono wobec peptydu zawierającego fosforylowaną serynę w pozycji 411 kinazy p70S6 (Santa Cruz Biotechnology). Unieruchomione pierwszorzędowe przeciwciała wykrywano za pomocą specyficznych przeciwciał drugorzędowych sprzężonych z izotiocyjanianem fluoresceiny (Alexa Fluor 488, rozcieńczenie 1: 200, Molecular Probes Europe). Sekcje zostały zamontowane w żelu / górze (Bioptica) i uszczelnione. Sekcje kontroli negatywnej przygotowano przez pominięcie pierwszorzędowego przeciwciała. Sygnał immunofluorescencyjny mierzono za pomocą konfokalnego mikroskopu Leica (model TCS SP2) z zastosowaniem wyników w zakresie od 0 do 100, przy czym wyższe wyniki wskazują na bardziej rozległe wybarwianie.
Analiza statystyczna
Dane wyrażono jako średnie (. SD) i porównano przez analizę wariancji
[podobne: kolka trzustkowa, spiaczka cukrzycowa objawy, zaburzenie schizoafektywne ]
[patrz też: tamponada nosa, mięśnie mimiczne twarzy anatomia, perforatio tecta ]