Skip to content

Mutacje w TERT, gen odwrotnej transkryptazy telomerazowej, w niedokrwistości aplastycznej czesc 4

2 tygodnie ago

472 words

Kolejne manipulacje ekstraktami komórkowymi przeprowadzono jak opisano poprzednio.29 Mutacje inne niż mutacje kodonu 412 testowano co najmniej dwa razy w doświadczeniach transfekcji. Całkowity komórkowy RNA wyekstrahowano również odczynnikiem Trizol (Invitrogen) i oznaczono ekspresję TERT metodą Northern blot z sondami z randomizacją do sekwencji kodującej TERT. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej od nosicieli mutacji i kontroli oceniano w pożywce metylocelulozy dla liczby hematopoetycznych komórek progenitorowych przy użyciu rekombinowanych cytokin (StemCell Technologies), zgodnie z instrukcjami producenta. Kolonie mieloidalne i erytroidalne policzono 10 dni po potrójnym pokryciu próbki.
Analiza statystyczna
Różnice w częstości zmian sekwencji kodujących między próbkami od pacjentów z niedokrwistością aplastyczną a próbami kontrolnymi oceniano za pomocą dokładnego testu Fishera. Test nieparametryczny Kruskala-Wallisa, a następnie test wielokrotnego porównania Dunna, zastosowano do porównania różnic w liczbie kolonii w testach hematopoetyczno-progenitorowych.
Wyniki
Mutacje
Tabela 1. Tabela 1. Mutacje i polimorfizmy prowadzące do zmian aminokwasowych w genach kodujących kompleks telomerazy u pacjentów z nabytą anemią aplastyczną. Tabela 2. Tabela 2. Charakterystyka kliniczna i profile laboratoryjne pacjentów przenoszących mutacje TERT. Rysunek 1. Rycina 1. Mutacje TERT w niedokrwistości aplastycznej. Panel A pokazuje liniową strukturę genu TERT, który koduje odwrotną transkryptazę ludzkiej telomerazy i mutacje związane z niedokrwistością aplastyczną. Segmenty reprezentują eksony. Niesynonimowe mutacje znaleziono w eksonach 2 (kodon 202 Ala / Thr i kodon 412 His / Tyr), 5 (kodon 694 Val / Met), 7 (kodon 772 Tyr / Cys) i 15 (kodon 1090 Val / Met). Panel B pokazuje liniową strukturę mutacji TERT i aplastycznej anemii w odniesieniu do znanych domen funkcjonalnych. DAT oznacza zdysocjowane aktywności telomerazy, L1 i L2 nieistotnych regionów łącznikowych i motyw specyficzny dla T-telomerazy. Panel C pokazuje długość telomerów w leukocytach krwi obwodowej od pacjentów z niedokrwistością aplastyczną i mutacjami genu TERT. Długość telomerów mierzono za pomocą fluorescencyjnej analizy hybrydyzacji in situ. Linie reprezentują 1., 10., 50., 90. i 99. percentyl długości telomerów w dopasowanych do wieku granulocytach i limfocytach kontrolnych, w oparciu o grupę odniesienia 400 osób. Długość telomerów w granulocytach od sześciu z siedmiu pacjentów była poniżej dziesiątego centyla (wyjątkiem był pacjent C, o długości telomerów granulocytów poniżej 15 centyla), podczas gdy długość telomerów limfocytów od pięciu pacjentów była na poziomie lub poniżej dziesiątego centyla. Panel D pokazuje rodowód Pacjenta A, który przenosi kodon 202 mutację Ala / Thr w TERT; rodowód sugeruje, że mutacja wiąże się z krótkimi telomerami. Długość telomeru jest opisana jako normalna, niska lub bardzo niska, w zależności od skorygowanej pod względem wieku długości telomerów w normalnych kontrolach, gdzie bardzo niska oznacza długość równą lub niższą od percentyla normalnych dobranych pod względem wieku kontroli; niski, równy lub niższy od dziesiątego centyla; i normalne, między percentylem dziesiątym a 90.
[podobne: daunorubicyna, złamanie nosa objawy, kolka trzustkowa ]
[więcej w: zapalenie tętnicy skroniowej, unerwienie serca, fomepizol ]