Skip to content

Mutacje w TERT, gen odwrotnej transkryptazy telomerazowej, w niedokrwistości aplastycznej ad 7

2 tygodnie ago

122 words

Analiza powielenia telomerowego lizatów komórkowych z pacjentów wykazała, że aktywność telomerazy była zmniejszona o około 50 procent w porównaniu do aktywności zdrowych, niespokrewnionych kontroli (Figura 2A). Funkcja hematopoetyczna
Mierzyliśmy liczbę kolonii erytroidalnych i mieloidalnych w próbkach krwi obwodowej od dwóch zdrowych rodzeństwa Pacjenta A (który miał kodon 202 mutację Ala / Thr, jedno z rodzeństwa było nosicielem i jeden nie-nosiciela) i od dwójki rodzeństwa Pacjenta G ( który miał mutację 1090 Val / Met kodonu, jedno z rodzeństwa było nosicielem i jeden bez nośnika) i we krwi z zdrowych kontroli. Całkowita liczba progenitorów była znacząco niższa wśród nosicieli niż wśród nosicieli bez kontroli (średnie [. SD] kolonie, odpowiednio 41 . 9, 116 . 45 i 118 . 30, P <0,05), co wskazuje, że funkcja hematopoetyczna nosiciele mutacji TERT.
Aktywność telomerazy komórek transfekowanych wektorami zawierającymi mutację TERT
Warianty sekwencji TERT związanych z anemią aplastyczną utworzono w wektorze ekspresyjnym TERT, który następnie transfekowano do komórek VA13 + TERC. Jak pokazano na Figurze 2B, preparaty TERT związane z niedokrwistością aplastyczną wykazywały różne poziomy niedoboru aktywności enzymatycznej telomerazy w tych rekonstytuowanych komórkach. Podczas gdy lizaty komórek niosące mutacje TERT w kodonach 202, 694, 772 i 1090 wykazały mniej niż procent aktywności telomerazy w porównaniu z lizatem zawierającym gen TERT typu dzikiego (ścieżki do 15), mutacja kodonu 412 dawała około 50 procent aktywność telomerazy (ścieżki 19-24). Utrata funkcji enzymatycznej w transfekowanych komórkach nie była spowodowana zmienioną transkrypcją zmutowanego genu TERT lub niestabilnością matrycowego RNA, ponieważ stwierdzono, że poziomy ekspresji RNA są podobne do tych w normalnej próbce TERT typu dzikiego, jak określono Analiza Northern blot (rysunek 2D).
Koekspresja wektorów TERT typu dzikiego i zawierającego mutację
Telomeraza działa jako multimeryczny kompleks składający się z co najmniej dwóch białek enzymu TERT i dwóch matryc RNA TEREC.31-36 Ponieważ pierwotne hodowle komórek od pacjentów przenoszących mutacje TERT zmniejszyły aktywność telomerazy, zbadaliśmy, czy obniżenie było spowodowane niewydolnością serca lub dominacją negatywny mechanizm działania zmutowanego TERT w sekwencji typu dzikiego. Przeprowadziliśmy kotransfekcję równych ilości wektora zawierającego TERT typu dzikiego i poszczególne mutacje z komórkami VA13 + TERC. Jak pokazano na Figurze 2C, lizaty z komórek, które uległy kotransfekcji z TERT typu dzikiego i kodonem zawierającym TERT 202 Ala / Thr, kodon 694 Val / Met, kodon 772 Tyr / Cys lub kodon 412 mutacje His / Tyr (na : Stosunki lub 1: 3, w oparciu o stężenie plazmidu) również wykazały zmniejszenie aktywności enzymatycznej telomerazy o około 50% (ścieżki 28, 29, 30, 34, 35, 36, 43, 44, 45 i 49 do 54 ) w porównaniu z próbkami transfekowanymi TERT typu dzikiego i wektorami zawierającymi polimorfizm kodonu 441 (ścieżki 46, 47 i 48) lub wektor kontrolny eksprymujący TERT typu dzikiego (ścieżki 25, 26, 27, 31, 32 , 33, 40, 41 i 42). Ta aktywność telomerazy typu dzikiego została tylko częściowo zredukowana przez zmutowany TERT, co zasugerowało mechanizm haploinsufficiency.
Dyskusja
W tym badaniu znaleźliśmy niesynonimowe mutacje w genie TERT, który koduje odwrotną transkryptazę telomerazy u pacjentów z pozornie nabytą anemią aplastyczną
[więcej w: złamanie nosa objawy, martwica balsera, spiaczka cukrzycowa objawy ]
[przypisy: kamica trzustkowa, kolka trzustkowa, gastrojejunostomia ]